Usa sa mga nag-unang bentaha sa cell culture mao ang abilidad sa pagmaniobra sa pisikal nga chemistry sa cell reproduction (ie temperatura, pH, osmotic pressure, O2 ug CO2 tension) ug physiological nga palibot (ie hormone ug nutrient concentration).Dugang sa temperatura, ang palibot sa kultura kontrolado sa medium nga pagtubo.
Bisan kung ang pisyolohikal nga palibot sa kultura dili klaro sama sa pisikal ug kemikal nga palibot niini, usa ka labi ka maayo nga pagsabut sa mga sangkap sa serum, pag-ila sa mga hinungdan sa pagtubo nga gikinahanglan alang sa pagdaghan, ug usa ka labi ka maayo nga pagsabut sa microenvironment sa mga selula sa kultura.(Ie interaksyon sa cell-cell, pagsabwag sa gas, interaksyon sa matrix) karon nagtugot sa pipila ka mga linya sa cell nga ma-culture sa serum-free media.
1. Ang palibot sa kultura makaapekto sa pagtubo sa selula
Palihug timan-i nga ang mga kondisyon sa kultura sa selula lahi sa matag matang sa selula.
Ang mga sangputanan sa pagtipas gikan sa mga kondisyon sa kultura nga gikinahanglan alang sa usa ka partikular nga tipo sa selula gikan sa pagpahayag sa abnormal nga mga phenotypes ngadto sa hingpit nga kapakyasan sa cell culture.Busa, girekomenda namon nga pamilyar ka sa linya sa cell nga gusto nimo ug higpit nga sundon ang mga panudlo nga gihatag alang sa matag produkto nga imong gigamit sa imong eksperimento.
2. Mga panagana alang sa pagmugna og usa ka optimized cell culture environment para sa imong mga cell:
Kultura media ug serum (tan-awa sa ubos alang sa dugang nga impormasyon)
pH ug CO2 nga lebel (tan-awa sa ubos para sa dugang impormasyon)
Pag-ugmad og plastik (tan-awa sa ubos para sa dugang impormasyon)
Temperatura (tan-awa sa ubos para sa dugang nga impormasyon)
2.1 Cultural Media ug Serum
Ang medium nga kultura mao ang labing hinungdanon nga bahin sa palibot sa kultura, tungod kay naghatag kini mga sustansya, mga hinungdan sa pagtubo ug mga hormone nga gikinahanglan alang sa pagtubo sa cell, ug gi-regulate ang pH ug osmotic pressure sa kultura.
Bisan kung ang una nga mga eksperimento sa kultura sa cell gihimo gamit ang natural nga media nga nakuha gikan sa mga extract sa tisyu ug mga likido sa lawas, ang panginahanglan alang sa standardisasyon, kalidad sa media, ug dugang nga panginahanglan misangpot sa pag-uswag sa definitive media.Ang tulo ka batakang matang sa media mao ang basal media, pagkunhod sa serum media ug serum-free media, ug sila adunay lain-laing mga kinahanglanon alang sa serum supplementation.
2.1.1 Batakang medyum
Gibco cell culture medium
Kadaghanan sa mga linya sa cell maayo nga motubo sa sukaranan nga media nga adunay mga amino acid, bitamina, dili organikong mga asin, ug mga gigikanan sa carbon (sama sa glucose), apan kini nga sukaranan nga mga pormulasyon sa media kinahanglan nga dugangan sa serum.
2.1.2 Pagkunhod sa serum medium
Botelya nga adunay Gibco Low Serum Medium
Ang laing estratehiya sa pagpakunhod sa dili maayo nga mga epekto sa serum sa mga eksperimento sa kultura sa selula mao ang paggamit sa serum-reduced media.Ang pagkunhod sa serum medium usa ka sukaranan nga medium nga pormula nga dato sa mga sustansya ug mga hinungdan nga nakuha sa hayop, nga makapakunhod sa gidaghanon sa gikinahanglan nga serum.
2.1.3 Serum-free medium
Botelya nga adunay medium nga wala’y serum nga Gibco
Ang serum-free medium (SFM) naglikay sa paggamit sa serum sa hayop pinaagi sa pag-ilis sa serum sa angay nga nutrisyon ug mga pormulasyon sa hormone.Daghang mga nag-unang kultura ug mga linya sa cell adunay serum-free medium nga mga pormulasyon, lakip ang Chinese Hamster Ovary (CHO) recombinant nga linya sa produksiyon sa protina, lainlaing hybridoma cell lines, mga linya sa insekto Sf9 ug Sf21 (Spodoptera frugiperda), ingon man alang sa Ang host alang sa paghimo sa virus. (pananglitan, 293, VERO, MDCK, MDBK), ug uban pa. Usa sa mga nag-unang bentaha sa paggamit sa usa ka serum-free medium mao ang abilidad sa paghimo sa medium nga mapili alang sa piho nga mga matang sa cell pinaagi sa pagpili sa usa ka angay nga kombinasyon sa mga hinungdan sa pagtubo.Ang mosunod nga talaan naglista sa mga bentaha ug disbentaha sa serum-free media.
Bentaha
Dugangi ang katin-aw
Mas makanunayon nga performance
Mas dali nga pagputli ug pagproseso sa ubos
Tukma nga pagsusi sa function sa cell
Dugangi ang pagka-produktibo
Mas maayo nga pagkontrol sa mga reaksyon sa physiological
Gipalambo nga cell media detection
Disbentaha
Mga kinahanglanon sa piho nga medium nga pormula sa cell type
Kinahanglan ang mas taas nga kaputli sa reagent
Paghinay sa pagtubo
2.2.1 pH nga lebel
Kadaghanan sa normal nga mga linya sa selula sa mammalian motubo nga maayo sa pH 7.4, ug ang mga kalainan tali sa lainlaing mga linya sa selula gamay ra.Bisan pa, ang pipila nga nabag-o nga mga linya sa cell gipakita nga mas maayo nga motubo sa gamay nga acidic nga palibot (pH 7.0 - 7.4), samtang ang pipila nga normal nga linya sa fibroblast cell mas gusto ang gamay nga alkaline nga palibot (pH 7.4 - 7.7).Ang mga linya sa selula sa insekto sama sa Sf9 ug Sf21 labing maayo nga motubo sa pH 6.2.
2.2.2 lebel sa CO2
Gikontrol sa medium nga pagtubo ang pH sa kultura ug gi-buffer ang mga selyula sa kultura aron mapugngan ang mga pagbag-o sa pH.Kasagaran, kini nga buffering makab-ot pinaagi sa pagbaton og organic (pananglitan, HEPES) o CO2-bicarbonate-based buffers.Tungod kay ang pH sa medium nagdepende sa delikado nga balanse sa dissolved carbon dioxide (CO2) ug bicarbonate (HCO3-), ang mga pagbag-o sa atmospheric CO2 mag-usab sa pH sa medium.Busa, sa diha nga ang paggamit sa usa ka medium buffered uban sa usa ka CO2-bicarbonate-based buffer, kini mao ang gikinahanglan nga sa paggamit sa exogenous CO2, ilabi na sa diha nga culturing mga selula sa bukas nga kultura pinggan o culturing nausab cell linya sa taas nga konsentrasyon.Bisan tuod kadaghanan sa mga tigdukiduki kasagaran naggamit sa 5-7% CO2 sa hangin, kadaghanan sa mga eksperimento sa cell culture kasagaran naggamit sa 4-10% CO2.Bisan pa, ang matag medium adunay girekomenda nga CO2 tension ug bicarbonate nga konsentrasyon aron makab-ot ang husto nga pH ug osmotic pressure;para sa dugang nga impormasyon, palihog tan-awa ang mga instruksyon sa medium manufacturer.
2.3 Pag-ugmad sa mga plastik
Ang mga plastik sa cell culture anaa sa lain-laing mga porma, gidak-on ug mga ibabaw nga mohaum sa lain-laing mga aplikasyon sa cell culture.Gamita ang cell culture plastic surface guide ug cell culture container guide sa ubos para tabangan ka sa pagpili sa saktong plastic para sa imong cell culture application.
Tan-awa ang tanang Thermo Scientific Nunc cell culture plastics (link sa advertising)
2.4 Temperatura
Ang kamalaumon nga temperatura alang sa kultura sa cell nagdepende sa usa ka dako nga gidak-on sa temperatura sa lawas sa host diin ang mga selyula nahimulag, ug sa usa ka gamay nga gidak-on sa anatomical nga mga pagbag-o sa temperatura (pananglitan, ang temperatura sa panit mahimong mas ubos kaysa sa kaunuran sa kalabera. ).Para sa cell culture, ang overheating mas seryoso nga problema kaysa overheating.Busa, ang temperatura sa incubator sa kasagaran gibutang gamay ubos sa labing maayo nga temperatura.
2.4.1 Labing maayo nga temperatura alang sa lain-laing mga linya sa cell
Kadaghanan sa mga linya sa selula sa tawo ug mammalian gitipigan sa 36°C hangtod 37°C para sa labing maayo nga pagtubo.
Ang mga selula sa insekto gitikad sa 27°C para sa labing maayo nga pagtubo;sila motubo nga mas hinay sa ubos nga temperatura ug temperatura tali sa 27°C ug 30°C.Labaw sa 30 ° C, ang kalagsik sa mga selula sa insekto mikunhod, bisan kung kini mobalik sa 27 ° C, ang mga selula dili maulian.
Ang mga linya sa avian cell nagkinahanglan og 38.5°C aron maabot ang pinakataas nga pagtubo.Bisan tuod kini nga mga selula mahimong tipigan sa 37°C, sila motubo nga mas hinay.
Ang mga linya sa selula nga nakuha gikan sa bugnaw nga dugo nga mga mananap (sama sa amphibian, cold-water fish) makaagwanta sa lapad nga temperatura nga 15°C ngadto sa 26°C.
Oras sa pag-post: Peb-01-2023