Ang Kontaminasyon sa Kultura sa Selyo Epektibong Nakunhuran

Ang kontaminasyon sa mga kultura sa selula dali nga mahimong labing kasagarang problema sa mga laboratoryo sa kultura sa selula, usahay hinungdan sa grabe nga mga sangputanan.Ang mga kontaminado sa cell culture mahimong bahinon sa duha ka mga kategorya, mga kemikal nga kontaminado sama sa medium, serum ug mga hugaw sa tubig, endotoxins, plasticizers ug detergents, ug biological contaminants sama sa bacteria, molds, yeasts, virus, mycoplasmas cross infection.Kontaminado sa ubang mga linya sa selula.Bisan kung imposible nga hingpit nga mawagtang ang kontaminasyon, ang kasubsob ug kagrabe niini mahimong mapakunhod pinaagi sa hingpit nga pagsabut sa gigikanan niini ug pagsunod sa maayo nga mga pamaagi sa aseptiko.

1. Kini nga seksyon naglatid sa mga nag-unang matang sa biolohikal nga kontaminasyon:
Kontaminasyon sa bakterya
Kontaminasyon sa agup-op ug virus
Kontaminasyon sa Mycoplasma
Kontaminasyon sa yeast

1.1 Kontaminasyon sa bakterya
Ang bakterya kay usa ka dako nga grupo sa ubiquitous nga single-celled microorganisms.Kasagaran kini pipila lang ka micron ang diyametro ug mahimong lainlain ang porma, gikan sa mga sphere hangtod sa mga rod ug mga spiral.Tungod sa ilang ubiquity, gidak-on, ug paspas nga pagtubo rate, bakterya, uban sa yeasts ug molds, mao ang labing komon nga biolohikal nga kontaminante sa cell kultura.

1.1.1 Pagtuki sa Kontaminasyon sa Bakterya
Ang kontaminasyon sa bakterya dali nga makit-an pinaagi sa biswal nga pagsusi sa kultura sulod sa pipila ka mga adlaw pagkahuman kini nataptan;
Ang mga nataptan nga kultura kasagarang makita nga dag-um (ie, lapok), usahay adunay manipis nga pelikula sa ibabaw.
Ang kalit nga pag-ubos sa pH sa medium nga kultura kanunay usab nga masugatan.
Ubos sa usa ka mikroskopyo nga ubos ang gahum, ang bakterya makita nga gamay, naglihok nga mga butil sa taliwala sa mga selyula, ug ang pag-obserbar sa ilawom sa usa ka mikroskopyo nga adunay taas nga gahum makasulbad sa mga porma sa indibidwal nga bakterya.

1.2Agup-op ug Virus kontaminasyon
1.2.1 Kontaminasyon sa agup-op
Ang mga agup-op maoy eukaryotic microorganisms sa fungal kingdom nga motubo sa porma sa multicellular filament nga gitawag og hyphae.Ang connective network niining multicellular filament adunay genetically identical nuclei nga gitawag ug colonies o mycelium.

Sama sa kontaminasyon sa lebadura, ang pH sa kultura nagpabilin nga lig-on sa panahon sa inisyal nga hugna sa kontaminasyon ug dayon paspas nga pagtaas samtang ang kultura labi nga nataptan ug mahimong madag-umon.Ubos sa mikroskopyo, ang mycelium kasagarang filamentous, usahay ingon dasok nga mga pungpong sa mga spore.Ang mga spora sa daghang mga agup-op mahimong mabuhi sa hilabihan ka mapintas ug dili maabiabihon nga mga palibot sa panahon sa ilang dormant nga yugto ug ma-aktibo lamang kung ang husto nga kondisyon sa pagtubo masugatan.

1.2.2 Kontaminasyon sa Virus
Ang mga virus kay mikroskopiko nga makatakod nga mga ahente nga mopuli sa makinarya sa host cell alang sa pagsanay.Ang ilang hilabihan ka gamay nga gidak-on nagpalisud kanila sa pag-ila sa kultura ug sa pagtangtang gikan sa mga reagents nga gigamit sa mga laboratoryo sa cell culture.Tungod kay ang kadaghanan sa mga virus adunay higpit nga mga kinahanglanon alang sa ilang mga host, kasagaran dili kini makaapekto sa mga kultura sa selula sa mga espisye gawas sa host.
Bisan pa, ang paggamit sa mga kultura sa selula nga nataptan sa virus mahimo’g maghatag usa ka seryoso nga peligro sa kahimsog sa mga kawani sa laboratoryo, labi na kung ang mga selula sa tawo o primate gipatubo sa laboratoryo.

Ang impeksyon sa virus sa mga kultura sa selula mahimong makit-an pinaagi sa electron microscopy, immunostaining nga adunay usa ka set sa antibodies, ELISA, o PCR nga adunay angay nga mga primer sa virus.

1.3 Kontaminasyon sa Mycoplasma
Ang Mycoplasmas maoy yanong bakterya nga walay mga bungbong sa selula, ug kini gituohan nga mao ang pinakagamay nga mga organismo nga nagkopya sa kaugalingon.Tungod sa ilang hilabihan ka gamay nga gidak-on (kasagaran ubos pa kay sa 1 micron), ang mycoplasma lisud nga makit-an hangtud nga kini makaabot sa hilabihan ka taas nga mga densidad ug hinungdan nga ang mga kultura sa selula madaot;Hangtud niana, kasagaran walay klaro nga timailhan sa impeksyon.

1.3.1 Detection sa kontaminasyon sa mycoplasma
Ang pipila ka hinay nga pagtubo nga mycoplasmas mahimong magpadayon sa mga kultura nga wala’y hinungdan sa pagkamatay sa cell, apan giusab nila ang pamatasan ug metabolismo sa mga host cell sa mga kultura.

Ang talamak nga impeksyon sa mycoplasma mahimong gihulagway pinaagi sa pagkunhod sa rate sa pagdaghan sa cell, pagkunhod sa density sa saturation ug agglutination sa kultura sa suspensyon.
Bisan pa, ang bugtong kasaligan nga paagi aron mahibal-an ang kontaminasyon sa mycoplasma mao ang pagsulay sa kultura kanunay gamit ang fluorescent staining (pananglitan, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, autoradiography, o pagsulay sa microbial.

1.4 Kontaminasyon sa lebadura
Ang mga lebadura maoy usa ka selula nga eukaryote sa gingharian sa fungal, gikan sa pipila ka microns (kasagaran) ngadto sa 40 microns (panagsa ra).

1.4.1 Pagtuki sa kontaminasyon sa yeast
Sama sa kontaminasyon sa bakterya, ang mga kultura nga kontaminado sa lebadura mahimong madag-umon, labi na kung ang kontaminasyon naa sa abante nga yugto.Ang pH sa mga kultura nga kontaminado sa lebadura gamay ra kaayo nga nagbag-o hangtud nga ang kontaminasyon mahimong mas grabe, diin ang pH kasagarang motaas.Ubos sa mikroskopyo, ang lebadura makita isip indibidwal nga ovoid o spherical nga mga partikulo ug mahimong makagama og mas gagmay nga mga partikulo.

2. Impeksyon sa krus
Bisag dili kasagaran sama sa kontaminasyon sa microbial, ang halapad nga cross-contamination sa daghang mga linya sa cell nga adunay HeLa ug uban pang paspas nga pagtubo sa mga linya sa cell usa ka tin-aw nga gihubit nga problema nga adunay grabe nga mga sangputanan.Pagkuha og mga linya sa cell gikan sa mga inila nga cell bank, kanunay nga susihon ang mga kinaiya sa mga linya sa cell, ug gamita ang maayong mga pamaagi sa aseptiko.Kini nga mga gawi makatabang kanimo nga malikayan ang kontaminasyon sa krus.Ang DNA fingerprinting, karyotyping ug isotyping makapamatuod kung adunay cross-contamination sa imong cell culture.

Bisag dili kasagaran sama sa kontaminasyon sa microbial, ang halapad nga cross-contamination sa daghang mga linya sa cell nga adunay HeLa ug uban pang paspas nga pagtubo sa mga linya sa cell usa ka tin-aw nga gihubit nga problema nga adunay grabe nga mga sangputanan.Pagkuha og mga linya sa cell gikan sa mga inila nga cell bank, kanunay nga susihon ang mga kinaiya sa mga linya sa cell, ug gamita ang maayong mga pamaagi sa aseptiko.Kini nga mga gawi makatabang kanimo nga malikayan ang kontaminasyon sa krus.Ang DNA fingerprinting, karyotyping ug isotyping makapamatuod kung adunay cross-contamination sa imong cell culture.